Reakcja biuretowa Piotrowskiego, Kocha i ksantoproteinowa.

Reakcja biuretowa Piotrowskiego.

Do probówki wlać roztwór wodny białka (np. albuminy). Proponuję przefiltrować przez sączek, aby roztwór był klarowny. Do 2 ml roztworu białka wlać 2 ml roztworu wodorotlenku sodu NaOH lub wodorotlenku potasu KOH o stężeniu 1 mol/decymetr sześcienny, doprowadzić do wrzenia. Do probówki nanieść delikatnie po ściance 1 ml 0,1% roztworu siarczanu sodu CuSO4. Na granicy zetknięcia obu cieczy tworzy się fioletowy pierścień. Reakcja biuretowa uwarunkowana jest obecnością grup:

Reakcję tę dają białka, peptony, polipeptydy. Umożliwia obserwację hydrolizy białka, bowiem białka dają zabarwienie niebieskofioletowe, produkty rozpadu (hydrolizy) od fioletowego do różowego. Aminokwasy nie dają zabarwienia.

Reakcja biuretowa Piotrowskiego; H. Rozanski, LBPiE PWSZ Krosno, marzec 2012 r.

Reakcja ksantoproteinowa.

Do probówki zawierającej 2 ml roztworu białka, np. albuminy dodać 1 ml stężonego kwasu azotowego HNO3 i delikatnie ogrzać. Roztwór białka zabarwia się na żółto. Po dodaniu ługu sodowego lub potasowego barwa uintensywnia się, nawet do pomarańczowej. Jest uwarunkowana obecnością w białku aminokwasów pierścieniowych, np. tryptofanu, tyrozyny, fenyloalaniny, z którymi kwas azotowy tworzy połączenia nitrowe.

Reakcja ksantoproteinowa; H. Rozanski, LBPiE PWSZ Krosno, marzec 2012 r.

Reakcja Kocha.

Do probówki zawierającej 2 ml roztworu białka (przefiltrować, aby był klarowny) dodawać kroplami 20% roztwór wodny kwasu sulfosalicylowego. W pewnym momencie powstaje zmętnienie, a nawet osad. Jest to reakcja bardzo czuła, bowiem kwas sulfosalicylowy strąca białko w rozcieńczeniu 1:50 000. Metoda ta znalazła zastosowanie do wykrywania białka w moczu.

Roztwór białka przefiltrowany przed dodaniem kwasu sulfosalicylowego.